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本制品由高质量的生物素与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成，能够快速、高效、灵敏、特异性地与链霉亲和素或亲和素以及偶联了链霉亲和素或亲和素的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化偶联了亲和素或链霉亲和素的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

生物素磁珠在生物医药领域内应用非常广泛，可以特异性地结合(链霉)亲和素偶联的抗原或者抗体，作为免疫沉淀、细胞分选、ELISA等反应的载体；结合(链霉)亲和素偶联的DNA或RNA片段，从细胞或组织提取物中分离特定的核酸-蛋白质复合物，用于蛋白质与核酸相互作用研究；结合(链霉)亲和素偶联的核酸探针，用于DNA、RNA杂交实验或mRNA的分离和纯化等；还可用于纯化单链(链霉)亲和素偶联的DNA寡核苷酸、分离(链霉)亲和素偶联的PCR产物等。

• 结合量容量高：与同类的很多产品相比，本制品具有非常高的结合容量，对复杂样品中(链霉)亲和素偶联的分子可以快速进行分离纯化，而且磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本制品每毫升 磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有大于等于4nmol高质量生物素，每mg磁珠可结合大于等于30μg(链霉)亲和素，最高可达60μg (链霉)亲和素，可高效地进行免疫沉淀等实验。
  
• 特异性强：本制品可特异性地结合(链霉)亲和素偶联的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等配体分子，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、Northern、qPCR、质谱分析等一系列后续的分析测试。
  
• 结合(链霉)亲和素偶联分子速度快，吸附时间短，可快速高效结合配体：本制品所使用的纳米级磁珠具有超大比表面积，有效缩短了(链霉)亲和素与生物素结合所需的时间。缩短操作时间可以避免在长时间操作过程中配体分子的降解，有效保持配体分子的活性及完整性。
  
• 使用便捷：本制品储存在特殊保护液中，不含甘油，磁性分离，无需离心。本制品不仅适用于少量样本的检测，也适用于高通量筛选的自动化操作系统，不同操作方法之间一致性高。

• 本制品需维持pH为6～8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。
  
• 本制品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性等。
  
• 在免疫沉淀或纯化时，建议设计阳性和阴性对照组。
  
• 待结合分子的类型、大小及(链霉)亲和素偶联方式和程度等都会影响结合效率，建议通过稀释法来确定每种具体应用的磁珠用量，同时可以考虑加大磁珠用量至待结合分子2～3倍摩尔数量以确保结合充分。
  
• 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如通用型蛋白酶抑制剂混合物、通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品)等。
  
• 如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。
  
• 酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。
  
• 酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的磁珠不可重复使用。为了尽量减少生物素的脱落，无论是手动操作还是自动操作，低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。
  
• 高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本制品与配体的结合可能有一定影响，但WB及IP细胞裂解液、RIPA裂解液(YT609/YT610/YT611)或NP-40裂解液等都完全适用。

• 缓冲液的准备：
  参考下表，根据具体的实验用途配制相应的缓冲液。
  

  缓冲液	成分	应用
  TBS	推荐10×TBS/1×TBS	预洗
  2×结合与洗涤缓冲液I	10mM Tris-HCl (pH7.5),1mM EDTA,2M NaCl,0.01%～0.1% Tween-20	核酸样品
  1×洗涤缓冲液II	PBS (pH7.4),0.05% Tween-20,0.01%～0.1% BSA(可选成分)	抗体/蛋白样品
  DNA/RNA洗脱缓冲液	95% formamide,10mM EDTA,pH8.2	核酸样品
  酸洗脱缓冲液	0.1M Glycine (pH2.0)	抗体/蛋白样品
  中和缓冲液	1M Tris-HCl,pH8.5～9.5	抗体/蛋白样品
  SDS-PAGE上样缓冲液	推荐5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液	抗体/蛋白样品

  • 可根据所结合分子的类型或实验需要，适当调整缓冲液的盐浓度及pH。
  • 2×结合与洗涤缓冲液I用于洗涤时须用等体积超纯水稀释至1×。
• 生物素磁珠准备：
  
  • 取磁珠并去除上清：用移液器轻轻吹打以充分重悬生物素磁珠，取20～100μL置于1.5mL离心管中待用。使用前置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤磁珠：加入1×TBS至最终体积为约0.5mL，用移液器轻轻吹打重悬生物素磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清，完成一次洗涤步骤。然后再按照前述洗涤步骤，洗涤2次。最终去除上清，并根据后续的实验目的，用适量的适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬生物素磁珠。
    
  • 本磁珠及溶液并非RNase-free处理，如果用于RNA相关的应用，在上述洗涤后，用0.5mL DEPC处理过的0.05M NaCl洗涤磁珠2次，每次2分钟；然后再用0.5mL DEPC处理过的0.1M NaCl洗涤一次。根据后续的实验目的，按照初始体积的量，用适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬生物素磁珠。
  • 通常，每个样品的磁珠用量约为20～100μL。具体可根据(链霉)亲和素偶联分子的多少，参考基本信息表中磁珠的“结合能力”，计算(链霉)亲和素偶联分子的加入量。根据不同的实验目的，可以考虑(链霉)亲和素偶联分子的加入量为磁珠载量的1～2倍，使磁珠饱和，即把磁珠充分利用，此时通常实验目的是分离纯化；或者加入磁珠的载量是待分离纯化的(链霉)亲和素偶联分子的2～3倍，以确保(链霉)亲和素偶联分子能被充分分离纯化，此时通常实验目的是为了对样品中的(链霉)亲和素偶联分子进行定量分析。
  • 多个样品时，可以取总磁珠量合并洗涤处理后再平分到各个样品管中，洗涤液用量须相应增加。
  • 须避免待用时间过长，导致磁珠干燥。
• (链霉)亲和素偶联核酸的结合和洗脱：
  
  • 磁珠重悬：接步骤2b或2c，用2倍原始磁珠体积的2×结合与洗涤缓冲液I重悬磁珠。
    
  • 核酸吸附：加入等体积的用超纯水配制的(链霉)亲和素偶联核酸样品(加入样品后体积为原始磁珠体积的4倍)，充分振荡混悬，置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育10～30分钟或4℃孵育2小时。
    
    • 可通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量。
  • 磁性分离：将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤：取1mL 1×结合与洗涤缓冲液I加入分离得到的磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。再重复洗涤1～2次。
    
  • 洗脱：加入100μL或适量的DNA/RNA洗脱缓冲液，65℃孵育5分钟或90℃孵育2分钟。
• (链霉)亲和素偶联抗体或蛋白的结合和洗脱：
  
  • 抗体或蛋白吸附：加入适量用1×洗涤缓冲液II稀释的(链霉)亲和素偶联抗体、蛋白、抗原抗体复合物或蛋白复合物，充分振荡重悬磁珠，置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育30～60分钟或4℃孵育4～16小时。
    
  • 磁性分离：将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤：取1mL的1×洗涤缓冲液II加入分离得到的磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。重复洗涤3～4次。
    
  • 洗脱：根据目的核酸或蛋白的特点及后续实验要求，可以选择如下方法之一或其它合适方法进行洗脱。
    
    • 酸性洗脱缓冲液洗脱：每个样品加入100μL或适量酸洗脱缓冲液，混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育5分钟。然后置于磁力架上分离1分钟，将上清转移到新的离心管中，然后加入15μL 中和缓冲液进行中和。洗脱液置于4℃待用，或者-20℃长期保存。
      
      • 如果选择酸性洗脱缓冲液进行洗脱，就有可能发生生物素脱落，需注意孵育时间不要超过10分钟。
      • 酸性洗脱缓冲液能破坏绝大部分的抗体与抗原的相互作用。但为了确保更好的洗脱效果，可预先用300μL 0.1% Tween-20的水溶液洗涤磁珠1次。
    • SDS-PAGE上样缓冲液或0.1% SDS洗脱：每个样品加入100μL或适量的1×SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS，95℃加热3分钟。置于磁力架上分离1分钟，取上清用于SDS-PAGE电泳或Western检测等。
      
      • 如果选择SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS进行洗脱，那么洗脱液将包含生物素、(链霉)亲和素偶联抗体或蛋白。